Filtrum fluorescens essentiale elementum est in microscopio fluorescens.Systema typicum tres filtra fundamentales habet: excitatio colum, colum emissio et speculum dichroicum.Plerumque in cubo fasciculati sunt ut globus microscopio inserendus.
Quomodo facit fluorescens opus colum?
Excitatio Filter
Filtra excitatio lucent certae necem et impedimentum aliorum aequalitatum transmittunt.Colores diversorum colorum producere possunt, colum ut unum tantum colorem permittant.Filtra excitatio in duo genera principalia veniunt - Filtra longa transeunt et filtra pertranseunt.Excitator plerumque est fasciae colum quae tantum aequalitates a fluorophore occupatas praeterit, ita extenuando excitationem aliorum fluorescentium et excitationem claudentium lumen in globo emissione fluorescentiae.Ut patet per lineam hyacinthinam in figura, BP est 460-495, quod significat non nisi per fluorescentiam 460-495nm transire.
In illustratione posita est via microscopii fluorescentiae et percolationes omnes luminis fontis aequalitates, excepto fluorophore excitationis.Filtrum transmissio minima dictat splendorem et splendorem imaginum.Minimum 40% transmissio pro quavis excitatione colum commendatur ita ut transmissio specimen sit >85%.Sed latitudo colum excitationis penitus intra fluorophore excitationis ita vagari debet ut centrum necem (CWL) colum quam proxime ad apicem excitationis necem fluorophori sit quam proxime potest.Excitatio colum densitas optica (OD) dictat tenebras imaginum background;OD mensura est quam bene filtrum praecludit aequalitatem extra extensionem vel latitudinem transmissionis.Minimum OD of 3.0 commendatur, sed OD ipsius 6.0 vel maius specimen est.
Filtrum emissio
Filtra emissio eo inserviunt ut fluorescentia desiderabilis ab exemplo ad detectorem perveniret.Breviores aequalitates obstruunt et altas transmissiones longiorum aequalium habent.Genus colum cum multis etiam coniungitur, eg BA510IF in figura (obice colum) designatio illa ad necem refertur ad 50% suae maxime transmissionis.
Eaedem commendationes ad excitationem filorum vera sunt pro emissione filorum: minima transmissio, band latitudo, OD et CWL.Colamentum emissio cum ideali CWL, minimi transmissionis, et OD coniunctio, imagines quam maxime clarissimas praebet, cum altissimis interclusio fieri potest, et detectionem in signis emissionis languidissimis efficit.
Speculum Dichroicum
Speculum dichroicum inter colum colum et emissionem colum in 45° angulum positum est et signum excitationis in fluorophore reddit, dum signum emissionis ad detectorem transmittens.Specimen dichroici filtra et trabes scindentes acutas habent transitus inter maximam reflexionem et maximam transmissionem, cum >95% reflexionem ad bandam excitationis colum et transmissionis >90% ad band latitudinem emissionis sparguntur.Filtrum cum intersectione fluorophore (λ ) in mente elige, ad lucem vagam obscuratis et maximize fluorescentium imaginis signum ad sonum proportionis.
Speculum dichroicum in hac figura est DM505, ita appellatum quod DV nanometrorum sit necem ad 50% maximi transmissionis huius speculi.Transmissio curva pro hoc speculo ostendit transmissionem altam supra 505 um, guttam arduam in transmissione ad sinistrum DV nanometrorum, et maximam reflexionem ad sinistram DV nanometri, sed tamen potest habere aliquam transmissionem infra 505 um.
Quid interest inter angustias longas et globum trans- filtra?
Filtra fluorescens in duo genera dividi possunt: longus transitus (LP) et fascia transeuntium (BP).
Filtra longa transeuntes longas aequalitates transmittunt et breviores obstruunt.Abscissus in essendi valor ad 50% apicem transmissionis est, et omnes aequalitates supra abscissos per longas filtras transeunt.Saepe adhibentur in speculis dichroicis et emissis filtra.Filtra longpass adhibenda sunt cum applicatio maximam collectionem emissionis requirit et cum discrimen spectris non est optabile vel necessarium, quod plerumque fit ut specimina generant unam speciem emittentes in speciminibus cum humili gradu autofluoremcentiae background.
Cohors Filtra trans- mittens tantum cohortem quamdam necem transmittunt, et alia obstruunt.crosstalk minuunt, modo firmissima portio emissionis fluorophori spectri transmittenda, autofluorescentiam sonum minuunt et sic signum-ad-crepitum rationum emendant in speciminibus altis autofluorescentiae, quae diu transeuntes filtras offerre non possunt.
Quot genera fluorescens sparguntur BestScope ponit supplere potest?
Communes quaedam genera filorum includunt filtra caerulea, viridis et ultraviolacea.Ut patet in tabula.
| Filtrum Set | Excitatio Filter | Speculum Dichroicum | Obex Filter | DUXERIT lucerna unda Longitudo | Applicationem |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: Fluorescent anticorpus methodus · Acidinae aurantiacae: DNA, RNA ·Auramine: Tuberculus bacillus · EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: Fluorescentibus anticorporis methodus ·Propidium iodide: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Auto-fluorescensio observationis ·DAPI: DNA maculans · Hoechest 332528, 33342: usus pro chromosomatum inficiens |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Catecholamines ·5-hydroxy tryptamine ·Tetracyclina: Ossa, Teeth |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | ·Cy5 · Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Filter ponit, qui in usucapionibus fluorescentiae ordinantur, circa maiores aequalitates usus in applicationibus fluorescentiae, quae circa usum fluorophorum fundantur.Quam ob rem etiam nominantur a fluorophore ad imaginationem destinati, ut DAPI (hyacintho), FITC (viridis) vel TRITC (rubrum) cubi colum.
| Filtrum Set | Excitatio Filter | Speculum Dichroicum | Obex Filter | DUXERIT lucerna unda Longitudo |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Red | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Quomodo vis fluorescens sparguntur?
1. Principium fluorescentiae colum deligendi est, ut lumen emissionis fluorescens, quantum fieri potest, transeat per finem imaginativae, et simul excitationem omnino obstruat, ut summam adipiscendi rationem obtineat.Praesertim ad applicationem multiphotonis excitationis et totius reflexionis internae microscopii, sonitus debilis magnum etiam effectum imaginandi impedimentum faciet, ideo altior exigentia signum ad sonum proportio est.
2. Scire excitationem et emissionem spectri fluorophori.Pone fluorescentiam colum construere quae summus qualitas, summus oppositio imaginis cum background nigra, excitatio et emissio filtra altam transmissionem consequi debent cum minima passband murmure super regiones quae excitationi iugis vel emissiones fluorophore respondent.
3. Considera firmitatem filorum fluorescentium.Hae filtrae impervias esse debent ad fontes lucidos qui ultraviolet (UV) lucem gignunt, quae ad "bumout" perducere potest, praesertim spargentis excitantis, quod plenae illuminationis fonte subicitur.
Diversi Fluorescent Imagines Sample
Facultates in Interreti collectae et ordinatae sunt et solum ad discendum et ad communicationem adhibentur.Si praeiudicium est, fac nos ut deleas.
Post tempus: Dec-09-2022